質(zhì)粒的提取 (Tiangen質(zhì)粒提取試劑盒)過程：

1、挑菌： 選取培養(yǎng)板中大小中等的單個(gè)菌落， 消du牙簽接種到10ml搖菌管中， 其中含有卡那-霉素的LB約5ml， 37 °C， 220rpm恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)過夜。

   2、取上述2.0ml培養(yǎng)液， 于常溫下12000 rpm離心1分鐘， 棄上清， 干燥沉淀。

3、 加入250ul溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 渦旋振蕩， 完全懸浮xi 菌，不能留有沉淀， 否則會(huì)影響裂解。

4、加入250ul溶液P2， 快速上下顛倒8次， 常溫靜置3分鐘， 可見混合液逐漸變清、 粘稠， 表示已充分裂解。

5、再加入350 ul溶液Ⅲ， 快速上下顛倒8次， 可見白色絮狀物出現(xiàn)。

6、 常溫12000rpm離心10分鐘， 所得上清液倒入已經(jīng)用BL平衡過的過濾柱中，注意不要倒入白色絮狀物沉淀， 靜置3分鐘， 12000 rpm離心1分鐘。

    7、 加入500ul溶液PD， 12000 rpm離心1分鐘。

8、 加入600 ul溶液PW， 12000 rpm離心1分鐘； 此步驟再重復(fù)1次； 棄廢液后空管再次12000 rpm離心2分鐘。

    9、于超凈臺(tái)通風(fēng)干燥， 放置2-5分鐘， 加入33ul已加熱至65 °C的已滅jun 的ddH 2 O， 室溫靜置3分鐘， 12000 rpm離心2分鐘， 得到相關(guān)質(zhì)粒DNA， 測濃度， -20 °C保存?zhèn)溆谩?