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細(xì)胞復(fù)蘇與凍存

日期:2024-10-18 23:04
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摘要: 1、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 2、細(xì)胞凍存: 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 1、棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次,加入mL 0.25%(T25瓶) 2、-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; 3、將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加ml凍存液重懸細(xì)胞;...

1、細(xì)胞復(fù)蘇:
將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
000RPM左右條件下離心4min,棄上清,-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
2、細(xì)胞凍存:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
1、棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次,加入mL 0.25%T25瓶)
2、-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
3將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加ml凍存液重懸細(xì)胞;
4、將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。


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