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細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟
日期：2024-10-19 02:52
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摘要：
細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟：
1、確定目標(biāo)細(xì)胞系的相關(guān)信息，細(xì)胞的培養(yǎng)條件，細(xì)胞的增值速度，支原體污染情況；
2、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定MOI值，可通過(guò)查閱文獻(xiàn)確定慢病毒在目標(biāo)細(xì)胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)梯度實(shí)驗(yàn)，摸索合適MOI；
3、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；
4、 細(xì)胞鋪板，將需要的細(xì)胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；
5、 細(xì)胞感染，通過(guò)接種的細(xì)胞量及預(yù)實(shí)驗(yàn)得來(lái)的MOI來(lái)計(jì)算添加的病毒體積；
6、 撤病毒，第2天，一般不超過(guò)24h換...
細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟：
1、確定目標(biāo)細(xì)胞系的相關(guān)信息，細(xì)胞的培養(yǎng)條件，細(xì)胞的增值速度，支原體污染情況；
2、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定MOI值，可通過(guò)查閱文獻(xiàn)確定慢病毒在目標(biāo)細(xì)胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)梯度實(shí)驗(yàn)，摸索合適MOI；
3、 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；
4、 細(xì)胞鋪板，將需要的細(xì)胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；
5、 細(xì)胞感染，通過(guò)接種的細(xì)胞量及預(yù)實(shí)驗(yàn)得來(lái)的MOI來(lái)計(jì)算添加的病毒體積；
6、 撤病毒，第2天，一般不超過(guò)24h換液；
7、 轉(zhuǎn)染48h后選擇對(duì)應(yīng)的抗性 藥 物進(jìn)行篩選；
8、 篩選結(jié)束后進(jìn)行單克隆化，選擇陽(yáng)性克隆進(jìn)行培養(yǎng)。