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ELISA實驗洗滌過程操作技巧小結(jié)
日期：2024-10-18 19:46
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摘要：
聚苯乙烯因其具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能而被廣泛用于ELISA實驗的固相載體，聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，因此需要通過洗滌清 除在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定著實驗的成敗。上述提到的血清中存在紅細胞或纖維蛋白原，可以在加樣前離心時得到控制，同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時間減輕或避免對實驗結(jié)果的影響，同樣，對于血液存在的非特異性的IgG,實驗者很難在加樣時將其去除，那么解決的佳時機就是洗滌過程。
ELISA在洗滌過程中需注...
聚苯乙烯因其具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能而被廣泛用于ELISA實驗的固相載體，聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，因此需要通過洗滌清 除在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定著實驗的成敗。上述提到的血清中存在紅細胞或纖維蛋白原，可以在加樣前離心時得到控制，同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時間減輕或避免對實驗結(jié)果的影響，同樣，對于血液存在的非特異性的IgG,實驗者很難在加樣時將其去除，那么解決的佳時機就是洗滌過程。
ELISA在洗滌過程中需注意以下幾點：
(1)、板要平整，尤其是在用洗板機洗板的過程中，往往是3排一起洗，如果板不平，就很可能造成洗液有殘留，從而導(dǎo)致非特異性結(jié)合不能清 除干凈，對實驗結(jié)果造成干擾。
(2)、洗液溫度，實驗表明，洗液溫度也會影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板”問題。因此，好保持室溫在20℃-30℃。
(3)、洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。
(4)、洗液要新鮮配置，洗液要臨用前新鮮配制，放置時間過長易產(chǎn)生絮狀物或混濁，造成賭孔或花板。
(5)、洗板次數(shù)不夠或洗滌間隔時間過短也會造成由于洗板不凈而造成“花板”。