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細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
RAW 264.7:RAW 2647
1×106
P-X1100
產品詳情:
生長特性 貼壁細胞,不用yi酶消化
細胞形態(tài) 不規(guī)則形
生長培養(yǎng)基 DMEM+10% FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 1:6~1:8
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 1、該細胞不建議使用yi酶消化,yi酶會刺激分化; 2、 超過3天不傳代細胞容易分化; 3、 培養(yǎng)時,存在少量分化細胞,屬于正?,F(xiàn)象。
背景描述 RAW 264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW 264.7細胞不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性。RAW 264.7細胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導RAW 264.7細胞分解紅血球,但對腫瘤靶細胞無作用。
年齡(性別) 雄性,成年
組織來源 Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;單核細胞;巨噬細胞
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 白血病細胞
生物等級 2
倍增時間 ~12-30小時
受體表達情況 complement (C3)
抗原表達情況 H-2d
基因表達情況 lysozyme, H-2d; Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox).
保藏機構 ATCC; TIB-71 ECACC; 91062702
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
公司正在出售的產品:
磷酸化細胞骨架肌動蛋白樣蛋白3抗體 |
核苷酸結合蛋白1抗體 |
phospho-ARP3 (Ser418) |
生精細胞凋亡相關基因6抗體 Anti-TSARG6/DNAJB13 |
熱休克因子結合蛋白1樣蛋白1抗體 |
Haemophilus influenza |
HSBP1L1 |
流感嗜血桿菌蛋白抗體 |
磷酸酯酶-2Ac抗體 Anti-PP2Ac/PP4C |
NUBP1 |
果糖-2,6-二磷酸酶心肌酶抗體 Anti-PFKFB2 |
HEV Capsid protein |
S期激酶相關蛋白1抗體 Anti-SKP1 |
嗅覺受體5K3抗體 |
戊型肝炎病毒抗體 |
OR5K3 |
大鼠Toll樣受體4(TLR4)elisa分析檢測試劑盒 |
原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體 Anti-YES1 |
TLR4 ELISA Kit |
蛋白激酶C結合蛋白NELL2抗體 Anti-NELL2/NRP2 |
人胱抑素SN(CST1)elisa分析檢測試劑盒 |
磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體 Anti-phospho-RUNX1/AML1(Ser249) |
CST1ELISAkit |
跨膜蛋白SEMA3D抗體 Anti-Semaphorin 3D/SEMA3D |
冰凍切片組織COLLAGEN III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 |
通用型牛藍舌?。?span>Blue Tongue)基因檢測試劑盒 |
大鼠腫瘤壞死因子誘導蛋白6(TSG-6)elisa檢測試劑盒 |
RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞小鼠白介素17B(IL17B)elisa檢測試劑盒 |
LOC83459蛋白抗體 |
細胞色素B561結構域蛋白1抗體 |
LOC83459 |
CYB561D1 |
實驗步驟:
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉染前24 h進行細胞鋪板,轉染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉細胞系。