咨詢電話：18117197628
英文簡稱
規(guī)格
貨號
AML-12:AML12
1×106
P-X1028
產品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認）
生長培養(yǎng)基:
DMEM/F12＋10% FBS＋0.5% ITS-G（100×）＋40ng/ml Dexamethasone＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:4-1:6
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述 The AML12 (alpha mouse liver 12) cell line was established from hepatocytes from a mouse (CD1 strain, line MT42) transgenic for human TGF alpha.
年齡（性別） 雄性；3月齡
組織來源 肝臟
細胞類型 自發(fā)永生化細胞
生物等級 BSL-1
倍增時間 ~37 hours
致瘤性 NO
基因表達情況 albumin; human transforming growth factor alpha (TGF alpha); mouse TGF alpha.
保藏機構 ATCC; CRL-2254 BCRC; 60326 BCRJ; 0354
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。
公司正在出售的產品：
|
胰島素樣生長因子結合蛋白樣1抗體 |
p21激活激酶2抗體 |
|
IGFBPL1 |
促甲狀腺素受體抗體（C端） Anti-TSHR (CT) |
|
蛋白激酶A錨定蛋白6抗體 |
HFM1 |
|
AKAP6 |
SEC63域內含蛋白1抗體 |
|
胰島素促進因子抗體（胰十二指腸源異型盒蛋白） Anti-PDX1 |
PAK2 |
|
蛋白酶體復合物C5抗體 Anti-PRS3/PRE7 |
Methamphetamine(4D2) |
|
轉錄因子蛋白SIM1抗體 Anti-SIM1 |
G蛋白偶聯(lián)受體80抗體 |
|
甲基（）單克隆抗體 |
OXGR1/GPR80 |
|
大鼠D-甘油醛3-磷酸elisa分析檢測試劑盒 |
EGF應答因子1抗體抗體 Anti-ZFP36L1/ERF1 |
|
Rat D-glyceraldehyde 3-phosphate ELISA Kit |
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶NEK8抗體 Anti-NEK8 |
|
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)elisa分析檢測試劑盒 |
視黃酸受體應答蛋白1抗體 Anti-RARRES1/TIG1 |
|
HumanLebtospiraIgMELISAKit |
S100鈣結合蛋白A7抗體 Anti-S100A7/Psoriasin |
|
Rac1鳥苷酸酶活性分析試劑盒 |
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)elisa檢測試劑盒 |
|
小鼠Slit2 elisa分析檢測試劑盒 |
AML-12小鼠肝實質細胞細胞NF KAPPA B P65蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 |
|
轉錄因子MAFF抗體 |
無精癥缺失基因1抗體 |
|
MAFF |
DAZ1 |