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英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
Calu-3:Calu3
1×106
P-X677
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：CaLu-3; CALU-3; Calu 3; Calu3; CALU3；人肺腺癌細(xì)胞
種屬來(lái)源：人
年齡性別：男；25歲
組織來(lái)源：肺；轉(zhuǎn)移灶；胸水腺癌
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介：Calu-3細(xì)胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建系的；該患者曾使用過(guò)環(huán)磷酰胺、博來(lái)霉素、阿霉素進(jìn)行。Calu-3細(xì)胞接種至裸鼠可成瘤；Calu-3細(xì)胞亦可作轉(zhuǎn)染宿主。
生物等級(jí)：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無(wú)
基因表達(dá)情況：Blood Type A; Rh+
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; HTB-55 BCRJ; 0264
培養(yǎng)基：89%MEM+10% FBS+1%PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~35-45 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：12；D16S539：12，14；D18S51：14，17；D19S433：12，13；D21S11：28，30；D2S1338：19；D3S1358：15，18；D5S818：11；D7S820：10，11；D8S1179：11，15；FGA：25；TH01：6，9.3；TPOX：8；vWA：16，17；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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螢火蟲熒光素酶抗體 |
白細(xì)胞酪氨酸激酶受體抗體 LTK |
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Luciferase |
磷酸化Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體 Phospho-KSR1 (Ser392) |
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10號(hào)染色體開放閱讀框30抗體 |
腺苷高半胱氨酸水解酶3抗體 SAH3 |
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C10orf30 |
線粒體rRNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 MRM1 |
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磷酸化丁酸鹽反應(yīng)因子1抗體 phospho-ZFP36L1 (Ser92) |
臂板蛋白3F抗體 Semaphorin 3F |
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B細(xì)胞遷移基因1抗體 BTG1 |
核受體相互作用蛋白1抗體 NRIP1 |
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CD79A抗體 CD79A |
腫瘤抑制因子FBW7抗體 CDC4 |
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過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α+β抗體 PGC1 alpha + beta |
豬源產(chǎn)腸性大腸桿菌K99抗體 K99 fimbrial protein |
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大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa檢測(cè)試劑盒 |
乳腺珠蛋白1抗體 Mammaglobin A |
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小鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)elisa檢測(cè)試劑盒 |
神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體 VANGL2 |
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駱駝轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
MAWD結(jié)合蛋白抗體 PBLD |
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石蠟切片總高氯酸萘醌（PAN）間接染色試劑盒 |
NK細(xì)胞抑制性受體2DL2抗體 KIR2DL2/CD158b |
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魚腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
線蟲M9緩沖液 |
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大鼠神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)elisa檢測(cè)試劑盒 |
Calu-3人肺腺癌細(xì)胞豚鼠生長(zhǎng)(GH)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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人白介素-1Rα（IL-1Rα）elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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組織PKCζ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
大鼠肌酐(Cr)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |